Para funcionar, la enzima debe primero fosforilarse usando una pequeña cantidad de 2,3-bisfosfoglicerato, que es producido por una enzima accesoria de glucólisis llamada 3-fosfoglicerato 2-cinasa.
El fosfato es retenido en forma de una FOSFAMIDA
A diferencia de las carboxiamidas, las fosfamidas poseen un ΔGº'HIDRÓLISIS negativo y pueden usarse para almacenar fosfatos activados
La enzima cede su fosfato el alcohol 2 y toma el de la posición 3, en forma neta, es como si lo hubiese isomerizado.